איך מצמידים דגימות פטרייתיות קפואות בגליצרול?
הוראות אלה מתארות הליך לצלחת פונקציונלית של דגימות פטרייתיות שהוקפאו בגליצרול על צלחות פטרי מוכנות.
הוראות אלה מתארות הליך לצלחת פונקציונלית של דגימות פטרייתיות שהוקפאו בגליצרול על צלחות פטרי מוכנות. אם מתרחשת צמיחה, ניתן לחלץ דגימות אלה בכדי לבודד ולרצף את ה- DNA שלהן לשימוש עתידי. כיוונים אלה הותאמו מהוראות מילוליות וחזותיות שניתנו על ידי גנטיקאים מנוסים.
- 1לבש כפפות!
- 2שכב את תחתית מיכל הקלקר עם שקיות קרח מהמקרר, שכבה אחת בסדר.
- 3אחזר את קופסת דגימות הגליצרול והנח אותה במיכל הקצף.
- 4מכסים את הקופסה בעוד שקיות קרח אחת או שתיים נוספות וסוגרים את המיכל.
- 5הגדר את ספסל המעבדה שלך. זה כולל הדלקת המבער שלך ובדיקה אם המפוח פועל לספסל המעבדה.
- 6מרססים את ספסל המעבדה באתנול של 70% ומנגבים אותו בעזרת קימוויפ.
- 7ריססו כפפות עם 70% אתנול והקציפו עד לייבוש.
- 8הניחו את מיכל הקצף ליד כפות הרגליים.
- 9פתח את מיכל הקצף ואת קופסת הדגימה ושלף את הדגימה הראשונה, שים מיד את שקיות הקרח הנוספות על גבי שאר הדגימות וסגור את מיכל הקלקר.
- 10תייג את צלחת הפטרי הראשונה בהתאם.
- 11פתח את המדגם והנח את הכובע במהופך על הספסל.
- 12החזיקו את הדגימה ביד שמאל וביד ימין. טובלים את הלולאה באתנול של 95% ומשלהבים אותה.
- 13התחל בסוף הכי קרוב לידית ולהבה את הלולאה עד שהיא אדומה; עשה את דרכך עד סוף הלולאה.
- 14פתח את צלחת הפטרי ביד המאפשרת שלך תוך החזקת הדגימה.
אחזר את קופסת דגימות הגליצרול והנח אותה במיכל הקצף. - 15וודא שקצה הלולאה מאוד אדום. תקעו אותו במהירות בדגימת הגליצרול הקפואה. זה עשוי להימשך מספר ניסיונות להכניס את קצה הלולאה במלואו למדגם.
- 16כאשר ניתן לראות בבירור דגימה על הלולאה, מורחים אותה תחילה קלות על נייר הסינון, וודאו שהיא מכוסה במלואה, ואז המשיכו למרוח אותה קלות על שאר צלחת הפטרי (אינכם רוצים לגרד את האגר). זה קרוב לוודאי ייקח 2 מטבלים או יותר למדגם.
- 17כאשר כל צלחת הפטרי מכוסה, הכניסו את הלולאה למיכל האתנול של 95%. סגור את צלחת הפטרי והדגימה.
- 18הנח את הדגימה בחזרה לקופסה. וודא שהקרח נמצא על הדגימות וסגור את מיכל הקלקר.
- 19פרפילם את צלחת הפטרי והניח אותה בצד.
- 20חזור על שלבים 8 -17 פעמים רבות ככל שיידרש.
- אם אתה שמאלי, אל תהסס להסתגל בהתאם.
- בדיקה חוזרת של הכלים המתויגים שלך לצינורות עשויה להועיל אם תאבד ספירה או תשכח מהיכן הפסקת ביום קודם.
- חשוב: יש להשלים את שלבי 8-17 מבלי שהדגימה תתייבש לחלוטין. אם אינך מצליח להשלים את השלבים 8-17 לפני שהדגימה נוזלית לחלוטין, החזקת הדגימה עם חתיכת מעטפת קצף תאט את תהליך ההפשרה.
ציוד
- מבער
- כפפות גומי
- לולאה
חומרים
- חבילות קרח
- מיכל קצף גדול
- דגימות גליצרול קפואות
- 70% אתנול בבקבוק שפריץ
- 95% אתנול במיכל זכוכית קטן
- רצועות פאראפילם
- כלים פטרי עם נייר פילטר בתוכם
- קופסת קימוויפס
- סמן
