כיצד לבצע בדיקת ELISA (בדיקת חיסון מקושרת לאנזים)?

ELISA (Assay-linked immunosorbent assay) היא בדיקה המאתרת את ריכוז הפתוגנים והאלרגנים הנמצאים בנוזל הנבדק. ניתן להשתמש בו לאיתור נוגדנים בדם או מיקוטוקסינים במזון. מדריך זה יעזור לביצוע בדרך כלל ELISA פשוט עם רצועות של 8 בארות.

חלק 1 מתוך 4: הגדרה

1

מקם את כל החומרים בהישג יד על משטח העבודה.
2

מניחים רצועות בארות מצופות ולא מצופות במגש בכיוון נוח.
3

תיבת פתיחה של טיפים.
4

הנח טיפ בקצה פיפטה הערוץ היחיד.
5

לשאוב 100μl של דגימת בקרה אחת בערכה ולחלק אותו למיקרוגל אחד לא מצופה.
6

חזור על שני השלבים האחרונים עבור כל בקרת ערכה וכל דגימה הנבדקת.

חלק 2 מתוך 4: דגירת דגימה ראשונית

1

מניחים טיפים חד פעמיים בכל קצה של פיפטה רב-ערוצית.
2

לשאוב 100μl מרצועת בארות לא מצופות באמצעות פיפטה רב-ערוצית ולחלק לרצועה של בארות מצופות.
3

השלך את העצות מהפיפטה הרב-ערוצית לכלי פסולת סמוך.
4

מערבולת מגש מיקרוגל במשך 20 שניות בתנועה מעגלית חלקה ללא הרמה.
5

המתן למשך הזמן המתאים שצוין לביצוע ELISA.
6

רוקן בארות לכיור כשחלף הזמן המתאים, תוך שימוש בדחיפה חזקה כלפי מטה עם בארות הפוכות.
7

הסר את הרצועה עם הבארות הלא מצופות.
8

מלא בקבוק כביסה בתמיסת כביסה מתאימה.
9

שטפו כל באר עם בקבוק כביסה 5 פעמים.
10

הפוך את צלחת המיקרוגל והטפיחה על משטח מכוסה במגבת נייר.
11

הניחו את צלחת המיקרוגל הנקייה עם הפנים כלפי מעלה על השולחן.

דגימות נוזליות להיבדק באמצעות ערכת ELISA (אסור לחרוג מהבארות הזמינות פחות בקרות בערכה).

חלק 3 מתוך 4: דגירה מצומדת

1

קח מאגר פיפטה אחד ומלא במגיב המצומד המתאים.
2

קח את הפיפטה הרב-ערוצית, הניח טיפים חד פעמיים בכל קצה ושאב 100μl מהמאגר המלא בצמידה.
3

לוותר לרצועת בארות מצופות.
4

השלך את העצות מהפיפטה הרב-ערוצית לכלי פסולת סמוך.
5

מערבולת מגש מיקרוגל במשך 20 שניות בתנועה מעגלית חלקה ללא הרמה.
6

המתן למשך הזמן המתאים שצוין לביצוע ELISA.
7

רוקן בארות לכיור כשחלף הזמן המתאים, תוך שימוש בדחיפה חזקה כלפי מטה עם בארות הפוכות.
8

שטפו כל באר עם בקבוק כביסה 5 פעמים.
9

הפוך את צלחת המיקרוגל והטפיחה על משטח מכוסה במגבת נייר.
10

הניחו את צלחת המיקרוגל הנקייה עם הפנים כלפי מעלה על השולחן.

חלק 4 מתוך 4: מצע / דגירה סופית

1

קח מאגר פיפטה אחד ומלא את ריאגנט המצע המתאים.
2

קח את הפיפטה הרב-ערוצית, הניח טיפים חד פעמיים בכל קצה ושאב 100μl מהמאגר מלא במצע.
3

לוותר לרצועת בארות מצופות.
4

השלך את העצות מהפיפטה הרב-ערוצית לכלי פסולת סמוך.
5

מערבולת מגש מיקרוגל במשך 20 שניות בתנועה מעגלית חלקה ללא הרמה.
6

המתן למשך הזמן המתאים שצוין לביצוע ELISA.
7

קח מאגר פיפטה אחד ומלא במגיב העצירה האדום המתאים.
8

קח את הפיפטה הרב-ערוצית, הניח טיפים חד פעמיים בכל קצה ושאב 100μl מהמאגר מלא בכיבוי עצירה אדום.
9

רוקן את הנוזל שנשאב לרצועת המיקרו-מילים שכבר התמלאה.
10

מערבולת צלחת מיקרוגל למשך 20 שניות בתנועה חלקה עם כיוון השעון מבלי להרים.
11

מניחים את מגש המיקרוגל בקורא צלחות המיקרוגל של ELISA תוך 10 דקות לקבלת תוצאות מיטביות.

מניחים את מגש המיקרוגל בקורא צלחות המיקרוגל של ELISA תוך 10 דקות לקבלת תוצאות מיטביות.

טיפים

ניתן להשתמש בפלטה מסתובבת במקום להסתחרר ביד.

דברים שתזדקק להם

צלחת מיקרוגל של 8x12 ריקה (חייבת להיות תואמת לרצועות המיקרוגל; עשויה להיות בערכה)
קורא מיקרו פלטות ELISA
פיפטה של ערוץ יחיד
רב פיפטה 8 ערוצים
קופסה 8x12 מלאה בטיפים חד פעמיים (חייבת להיות תואמת לפיפטות בשימוש)
שטפו בקבוק עם קצה פלסטיק מעוגל
3 מאגרי פיפטה
מגבת נייר
דגימות נוזליות לבדיקה באמצעות ערכת ELISA (אסור לחרוג מהבארות הזמינות פחות בקרות בערכה)
ערכת ELISA להיבדק (חייבת להיות תואמת לדוגמאות שנבדקות)
הוראות ערכה עם זמני המתנה
ריאגנט מצומד
מגיב מצע
מגיב לעצור אדום
דגימות נוזליות המשמשות כבקרה
רצועת מיקרוגל של 12 בארות לא מצופות (חייבת להיות תואמת לפלטת המיקרוגל)
רצועת מיקרוגל של 12 בארות מצופות (חייבת להיות תואמת לפלטת המיקרוגל)
שוטפים תמיסה

קרא גם: איך מכינים שעון מים (Clepsydra)?