כיצד לבצע כרומטוגרפיה של שכבה דקה?

חותכים צלחת TLC מלאי גדולה מהקופסה למלבנים. ככל הנראה תזדקק לחותך זכוכית אלא אם כן הצלחות כבר נקלעו מראש. יש שני צדדים לפלטת TLC. צד סיליקה וצד זכוכית. צד הזכוכית הוא רק זכוכית מחזירה חלקה, וצד הסיליקה הוא חומר לבן אבקתי שיתקלף אם תפריע לו. אז היזהר בעת טיפול בצלחות אלה כדי לא להרוס את ג'ל הסיליקה. יש להימנע מנגיעה בסיליקה עם האצבעות!

• מדוד את המידות של הלוחות שלך בגודל 1,5 x 4 ס"מ, או גדולים יותר אם אתה חושב שאתה זקוק ליותר מקום, אך גודל זה בדרך כלל מספיק. ואז ניקח קלות את צד הזכוכית, ולא את הצד סיליקה, עם הלהב או חותך הזכוכית שלך. זה צריך להיראות כמו התמונה למעלה, עם חתכים ברורים בזכוכית. עכשיו הרם בזהירות את הצלחת ושבר אותה על ידי כיפוף בידיים הרחק ממך. זכוכית תישבר בקלות לאורך קצה חלק אם תבקיע. היזהר מאוד, אך עליך להשתמש בכוח מספיק כדי לשבור את הכוס. זה עשוי לקחת קצת תרגול אם מעולם לא עשית זאת בעבר.

סמן את צלחת TLC. צייר קו בעיפרון כ- 0,5 ס"מ מהחלק התחתון ישר לרוחב. אם אתה עושה תגובה פשוטה, כמו ברוב המעבדות לתואר ראשון, צייר שלוש מקפים אנכיים במרווחים שווה על הקו האופקי. תייג שורות אלה כחומר התחלה (SM), נקודה משותפת (C) ותגובה (R). זה יוסבר יותר בשלבים מאוחרים יותר.

• השתמש רק בעיפרון כדי לכתוב ב- TLC. אם אתה משתמש בעט או בסמן זה יהרוס לך את צלחת ה- TLC מכיוון שהתקשורת הזו מכילה צבעים שהם תרכובות אורגניות שיתפתחו יחד עם התרכובות המעניינות אותך. גרפיט לא ינוע עם הממס. כתוב בעדינות רבה, אחרת תגרד את הסיליקה.

הכן את ממס הכרומטוגרפיה שלך. מערכת ממסים קלאסית היא אתיל אצטט והקסאן מכיוון שהם מתערבבים בקלות וקוטביות הממיס מותאמת בקלות. מקום טוב להתחיל בו הוא עם 20% אתיל אצטט בהקסן, שהינו זהה 1: 4 פתרון של אתיל אצטט כדי הקסאן. תוכלו למדוד בקלות 1 מ"ל אתיל אצטט ו -4 מ"ל הקסאן בגליל מדורג, או בכלי מדידת נוזלים אחר, ואז לשלב ביניהם כדי לתת את הפתרון הרצוי. בצנצנת סגורה, הניחו אתיל אצטט: הקסאן 1: 4 כך שתחתית הצנצנת תתכסה בקושי. סגור את המכסה על הצנצנת, אחרת הממס יתאדה במהירות ותצטרך להוסיף עוד.

• בדרך כלל יש להשתמש בתערובת ממס או ממסים של קוטביות נמוכה יותר העולה בהפרדה טובה.

הכן את הפתרונות שלך. קח את חומר ההתחלה לתגובתך ודלל אותו בבקבוקון קטן עם אתיל אצטט. TLC הוא מאוד רגיש ואפילו פתרון של 1% של המתחם שלך הוא מספיק. אתה באמת צריך רק פתרון מדולל מאוד להליך זה. למעשה, אם הפתרון שלך מרוכז מדי, הנקודות שלך יפסו ולא תקבל שום מידע שימושי מצלחת ה- TLC שלך. אם התגובה שלך היא גם פיתרון נחמד, תוכל לזהות אותה ישירות, אך אם תערובת התגובה שלך מורכבת יותר, ייתכן שתצטרך להסיר כמות קטנה ולדלל אותה בממיס מתאים (כגון אתיל אצטט) כדי ליצור פתרון. הפתרונות הטובים ביותר לזהות ברורים, אך הם אינם חייבים להיות. צבע הפתרון לא משנה. בתמונה לעיל, התמיסה ברורה וחסרת צבע מכיוון שתרכובת זו אינה צבעונית, אך לעתים קרובות יש לפתרונות צבע.

קח כמות קטנה של פתרון. השקיעו את קצה פיפטה הזכוכית לאחד מפתרונות התגובה שיצרתם זה עתה, ואת הפיפטה שהיא תשאב כמות קטנה. זה נקרא פעולה נימית ואנשים רבים מופתעים מכך שזה עובד. ראו בתמונה שלעיל להוכחה שהדבר אכן עובד. כל שעליך לעשות הוא להדביק את קצה הפיפטה לנוזל, וחלק ממנו יכנס לפיפטה. אינך זקוק לפיתרון רב מאוד לאיתור על הצלחת, כך שקצה הפיפטה מספיק.

לחץ קלות על קצה הפיפטה לצומת של אחד הקווים המקווקו ואת הקו האופקי שעשית בעבר בצד הסיליקה. זה יביא לכך שהפתרון בפיפטה יישאב לסיליקה, וכתוצאה מכך עיגול ממס קטן ומתחם. חשוב מאוד לזהות בקלילות. אם תלחץ חזק מדי, תפקיד יותר מדי חומר וייצור כתמים גדולים אשר יחפפו, ויהיה קשה לקרוא את ה- TLC. שלב זה ייקח תרגול, כך שתרצה לנסות זאת מספר פעמים, ולנסות להגיע לנקודות קטנות ככל האפשר לפני שתמשיך לשלב הבא.

• מצא את חומר ההתחלה במקפים הראשונים והשניים, ואת פתרון התגובה במקף השני והשלישי. המקף הראשון הוא הפניה שלך לחומר ההתחלה (SM), הנקודה האמצעית היא נקודה משותפת (C), והנקודה השלישית היא התייחסות התגובה (R). סוג זה של תצפית הופך את הצלחת המפותחת לקלה מאוד לקריאה. התמונה לעיל להבהרה חזותית.

ייבש את צלחת TLC. כל שעליך לעשות הוא להניח את הצלחת ולחכות דקה בערך עד שהממס יתאדה מהצלחת. אתה לא יכול להפעיל את הצלחת אם יש עדיין ממס. תוכל לראות נקודה רטובה בצלחת אם יש ממס. אתה לא צריך לחכות זמן רב לממסים נדיפים כאלה כמו אתיל אצטט והקסאן. דקה היא די והותר זמן להתמדה של הממיסים הללו.

לפתח את הצלחת. בעזרת פינצטה, הניחו בעדינות את צלחת ה- TLC לתוך צנצנת הממיסים, כאשר הקצה המנוקד של הצלחת בתחתית קרוב לממס. השקיעו את הקצה התחתון של הצלחת לממס, מה שמאפשר לממס לרוץ במעלה הצלחת, נושא את התרכובות יחד איתו. מכסים את הצנצנת במכסה. זה ימנע את התאדות הממיס ויהפוך את שלב הפיתוח למהיר הרבה יותר.

תן לצנצנת / מערכת ללא הפרעה אחרת תקבל את הלהקה מעוותת.

זה השלב בו מתרחשת הפרדה. אז היה סבלני והמתין 2-3 דקות עד שהמיס יגיע לראש הצלחת לפני שתסיר אותו. המתנה ארוכה בדרך כלל מספקת תוצאות טובות יותר, כל עוד לא נותנים לממיס לזרום מעבר לקצה העליון.

הסר את הצלחת. ברגע שהממס מתקרב להגיע לקצה העליון של הצלחת, השתמש בפינצטה כדי להסיר אותו בזהירות מהתא. סמן במהירות בעיפרון את המקום הגבוה ביותר אליו הגיע הממס. זה נקרא חזית הממס וחשוב לשים לב לחישובים מאוחרים יותר. אל תיגע בסיליקה באצבעותיך מכיוון שאתה יכול לטשטש את הנקודות או להפקיד תרכובות מידיך על הצלחת, מה שהופך את הצלחת שלך לחסרת תועלת.

ייבש את הצלחת. שוב, המתן עד שהממס יתאדה מהצלחת. זה אמור לקחת רק דקה או פחות אם אתה משתמש בממיס נדיף כגון אתיל אצטט הקסאן, אך חשוב שיהיה לך ממס בצלחת.

דמיין את הצלחת.

מניחים את הצלחת תחת אור אולטרה סגול. עליך להבחין בכמה נקודות במקומות שונים, המתאימות לתרכובות שונות. נוכחותם או היעדרם של כתמים תואמים להתקדמות התגובה, כך שניתן לקבוע בקלות מידע על תגובה בדרך זו. השתמש בעיפרון כדי להתוות את הנקודות כך שתוכל להמשיך לנתח את הצלחת לאחר שתסיר אותה ממקור ה- UV. התבונן בתמונה שלמעלה והבחין בנקודות השונות בגבהים שונים.