כיצד לבצע פס (מיקרוביולוגיה)?
על מנת לבטל את הסיכוי לזיהום צלחת הפטרי בעת חיסון פני האגר בצלחת הפטרי, יש לעקר את לולאת החיסון.
בטבע, חיידקים הם מצאו על כמעט כל שניתן להעלות על דעת משטח ולצערי לעתים רחוק קיימים אוכלוסיות מבודדות המכילות מינים ייחודיים של חיידק. זה מציב בפני המיקרוביולוג אתגר מעניין להשיג מושבות בודדות של חיידקים בשיטה פשוטה ומהירה כאחד. רצף שלושת המגזרים או המכונה בדרך כלל "T-Streak" הוא מיומנות בסיסית אך מכריעה המשמשת את המיקרוביולוג על בסיס יומי כדי לבודד, לזהות ולחקור מושבות של חיידקים.
חלק 1 מתוך 5: ציור ה- t
- 1הפוך לחלק האחורי של צלחת פטרי סטרילית המכילה אגר. שרטט קו שמתחיל מעט מעל נקודת המרכז. המשך לשרטט את הקו עד לפגיעה בקצה הלוח האחורי.
- 2צייר קו נוסף החל מהצד השמאלי של הלוח האחורי עד שאתה פוגע בצד השני. קו חדש זה צריך להיות מאונך לקו המקורי, מצטלב בנקודת ההתחלה. כעת יש לחלק את הצלחת האחורית של צלחת הפטרי לשלושה מגזרים, המופיעים כ"טי "גדול.
- 3תייג את הלוח האחורי של צלחת הפטרי עם מידע מעבדה רלוונטי כגון ראשי התיבות, התאריך, השעה ומקור התרבות.
חלק 2 מתוך 5: עיקור לולאת החיסון
- על מנת לבטל את הסיכוי לזיהום צלחת הפטרי בעת חיסון פני האגר בצלחת הפטרי, יש לעקר את לולאת החיסון.
- 1התחל על ידי חיבור מבער הבונסן למקור דלק והצתה שלו.
- 2הכנס את הלולאה ללהבה בזווית אנכית. המטרה היא שלולאת החיסון תהיה מעט מעל החרוט הכחול הפנימי של הלהבה. החזק אותו שם למשך מספר שניות.
- 3הסר את הלולאה מהלהבה. בשלב זה הלולאה סטרילית וחמה ביותר.
- יש לקרר את לולאת החיסון, אחרת החום הנותר יהרוג כל חיידק שנלקח מהתרבית.
- 4מצננים את לולאת החיסון. הרם את מכסה צלחת הפטרי מספיק בכדי להכניס את הלולאה. גע בקצה החיצוני של אגר התזונה. יש לשמוע צליל רוחש במגע ראשון. המשך להחזיק את לולאת החיסון על פני השטח למשך מספר שניות.
- 5הסר את לולאת החיסון מכלי הפטרי. הימנע מלגעת בכל משטח אחר בשלב זה, פעולה זו תזהם מחדש את לולאת החיסון.
גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר חומרים מזינים לעבר המגזר השני.
חלק 3 מתוך 5: חיסון הלולאה בתרבית מרק
- 1החזק את לולאת החיסון הסטרילית. פתח את מקור התרבות שלך כמו תרבות מרק.
- 2הכנס את הלולאה לתרבית, מערבל את התוכן כדי להבטיח פיזור אחיד של חיידקים בתוכו. עשה זאת למספר שניות.
- 3הסר את הלולאה ושחזר את הדגימה המקורית.
גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר התזונה לכיוון המגזר השלישי.
חלק 4 מתוך 5: חיסון הלולאה בתרבות מצופה
- 1בחר מושבה או קטע מהמדגם.
- 2הסר את הכיסוי מצלחת האגר וגרד את הדגימה שנבחרה עם לולאת החיסון.
- 3הניחו את כיסוי הצלחת בחזרה.
חלק 5 מתוך 5: חיסון אגר התזונה
- 1הרם את מכסה צלחת הפטרי מספיק בכדי להכניס את הלולאה. החל מהמגזר העליון של ה- "T", גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר התזונה בתבנית זיגזג. חשוב להישאר באזור בו אתה מחסן כעת.
- 2עקרו מחדש את לולאת החיסון כעת לאחר שהמגזר הראשון של ה"ט "חוסן. בצע את השיטה המתוארת בעיקור לולאת החיסון. זכרו לקרר את לולאת החיסון בקצה אגר המזין שלא זוהם בתרבות המקורית!
- 3סובבו את צלחת הפטרי 90 מעלות והרימו את המכסה בדיוק בכדי להכניס את הלולאה.
- 4התחל במגזר הראשון. גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר חומרים מזינים לעבר המגזר השני.
- 5המשך למגזר השני. גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר המזין בתבנית זיגזג.
- 6עקרו מחדש את לולאת החיסון כעת לאחר שהמגזר השני של ה"ט "חוסן. בצע את השיטה המתוארת בעיקור לולאת החיסון. זכור לקרר את לולאת החיסון בקצה אגר התזונה שלא זוהם בתרבות המקורית!
- 7סובבו את צלחת הפטרי 90 מעלות והרימו את המכסה בדיוק בכדי להכניס את הלולאה.
- 8התחל במגזר השני. גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר התזונה לכיוון המגזר השלישי.
- 9המשך למגזר השלישי. גרור קלות את לולאת החיסון על פני אגר המזין בתבנית זיגזג.
- מבער בונזן
- התאמות
- תרבות מעורבת (למשל Escherichia coli & Serratia Marcescens)
- לולאת חיסון
- מנות פטרי סטריליות המכילות אגר מזין
קרא גם: כיצד לחשב פגם המוני?
